小鼠干细胞病毒（MSCV）感染实验步骤

    小鼠干细胞病毒(MSCV)感染实验步骤
     注：本公司产品仅用于科研实验！  上海远慕ELISA试剂盒

    材料与试剂
    1.小鼠
    2.抗CD3与抗CD28抗体（Biolegend，100302，102102）
    3.白细胞介素-2（IL-2）（R&Dsystems402-ML-020）
    4.聚凝胺（Polybrene）（hexadimethrinebromide，SIGMAH9268）
    5.RPMI-1640培养基（GIBCO，11875-093）
    6.FBS（GEMBIO900-108）
    7.青霉素/链霉素溶液（GIBCO15140-122）
    8.（Invitrogen21985-023）
    9.PBS溶液（1XPhosphateBufferedSaline，GIBCO10010-023）
    10.小鼠干细胞病毒MSCV（Clontech634401）
 

    实验步骤
    1.用抗CD3与抗CD28抗体包被24孔板guoye。
    向24孔板每孔加入400μlPBS含有1μg/ml抗CD3抗体和0.5μg/ml抗CD28抗体。在盖子或封口上封上封口膜，保持在4℃黑暗guoye。第二天，吸除去抗体，每孔加入400μlRPMI-1640培养基，不要让板干燥。
    2.杀死小鼠并将CD4+CD44loCD62Lhi幼稚T细胞分类。
    3.24孔板PRMI-1640培养基中每孔播撒5×106细胞，培养细胞guoye。
    4.按1：2比例分配细胞（把一个孔的细胞分成两孔），加入IL-2至终浓度50U/ml，培养6h（37°C，5%CO2）。
    5.1200RPM旋转板5min（室温），吸除培养基，并加入1ml含有适量MSCV颗粒的RPMI-1640（病毒浓度取决于多于106cfu/ml的titter）以及5-10μg/ml3。聚凝胺。2500RPM旋转板90min（37°C）。
    6.除去上清液，加入RPMI-1640培养基供分化或增殖。