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技术支持

BA/F3细胞培养说明书

发布时间:2016-12-26   点击次数:2995次

 

一、细胞培养条件   
细胞英文名称BA/F3细胞中文名称 小鼠原B细胞
形态特性 生长特性悬浮
培养体系1640+10%FBS + 10ng/ml IL-3
传代方法1:2 - 1:4传代情况2~3天换液/传代
冻存条件90%FBS+10%DMSO支原体检测阴性

二、细胞收到后处理

    细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后,先打开外包装,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内,严格无菌操作。镜下观察:未超过80%汇合度时,可将瓶装的完全培养液移入废液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml完全培养液,悬浮细胞需离心处理,放入37℃、5%CO2孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。

三、细胞培养步骤

    1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过ye(或将细胞悬液加入6cm皿中,加入约6ml培养基,培养过ye)。第二天换液并检查细胞密度。

    2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

    1、对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

    1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

    2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

    3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

    4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

    2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

    方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

    方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

    3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心5分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及DMSO,冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

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