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技术支持

上海猪ELISA试剂盒的相关知识普及

更新时间:2019-09-24   点击次数:823次
  上海猪ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪磷脂水平,用纯化的猪磷脂抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入磷脂(PL),再与HRP标记的磷脂(PL)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的磷脂(PL)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中猪磷脂(PL)含量。
  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
  尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
  上海猪ELISA试剂盒采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
  不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

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