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技术支持

那么核酸电泳的原理是什么呢!
发布时间:2019-09-26   点击次数:238次

      带电荷的物质在电厂中趋向运动称为电泳,核酸电泳通常在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中进行,核酸探针、核酸扩增和序列分析等技术所不可缺少的组成部分。那么核酸电泳的原理是什么呢,下面我就就来说一下。

核酸电泳的原理:

1.核酸分子中糖-磷酸骨架中的磷酸基团,呈负离子化状态;核酸分子在一定的电场强度的电场中,他们会向正电极方向迁移;

2.电泳中使用无反应活性的稳定的支持介质,电泳迁移率(或迁移速度)与分子大小、介质粘度等成反比;

     因此,可在同一凝胶中、一定电场强度下分离出不用分子量大小或相同分子量但结构型有差异的核酸分子。

琼脂糖凝胶电泳原理:

       琼脂糖是从海藻中提取出来的一种线状高聚物。将琼脂糖在所需缓冲液中加热熔化成清澈、透明的溶胶,然后倒入胶模中,凝固后将形成一种固体基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。 

      将凝胶置电场中,在中性pH值下带电荷的核酸通过凝胶网孔向阳极迁移,迁移速率受到核酸的分子大小、构象、琼脂糖浓度、所加电压、电场、电泳缓冲液、嵌入染料的量等因素影响。在不同条件下电泳适当时间后,大小、构象不同的核酸片段将处在凝胶不同位置上,从而达到分离的目的。琼脂糖凝胶的分离范围较广,用各种浓度的琼脂糖凝胶可分离长度为200bp至50kb的DNA。 

聚丙烯酰胺凝胶电泳原理:

      聚丙烯酰胺凝胶通过丙烯酰胺单体、链聚合催化剂N,N,N’,N’-四甲基乙二胺(TEMED)和过硫酸铵以及交联剂N,N’-亚甲双丙烯酰胺之间的化学反应而形成。丙烯酰胺单体在催化剂作用下产生聚合反应形成长链,长链经交联剂作用交叉连接形成凝胶,其孔径由链长和交联度决定。链长取决于丙烯酰胺的浓度,调节丙烯酰胺和交联剂的浓度比例,可改变聚合物的交联度。 

     聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据电泳样品的电荷、分子大小及形状的差别达到分离目的,兼具分子筛和静电效应,分辨力高于琼脂糖凝胶电泳。可分离只相差1个核苷酸的DNA片段。 

     聚丙烯酰胺凝胶电泳用于分析和制备长度小于1kb的DNA片段。根据所要分离的核酸片段大小,可制备不同浓度的凝胶。 

     生物大分子在一定pH条件下,通常带电荷,将其置于电场中,会以一定的速度向与其电荷性质相反的电极迁移,迁移速度称电泳速率。电泳速率与电场强度、分子所带的静电荷数成正比,与分子与介质的摩擦系数成反比。摩擦系数与分子的大小、构型及介质的粘度有关。以上便是核算电泳的原理了。

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