产品搜索 更多
产品目录
联系方式
上海远慕生物科技有限公司
联系人:俞燕熙
手机:15000565797
电话:021-58999639
传真:021-50760790
地址:上海嘉定区
邮编:201805
邮箱:m13310162040@163.com
联系人:俞燕熙
手机:15000565797
电话:021-58999639
传真:021-50760790
地址:上海嘉定区
邮编:201805
邮箱:m13310162040@163.com
ELISA:用于检测未知抗原的双抗体夹心法
更新时间:2020-06-10 点击次数:800次
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
上一篇 : 免疫学检测方法与免疫技术 下一篇 : 氧化损伤,如何寻找适合自己实验应用的生物标志物