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技术支持

实验室常用溶液的配制!

发布时间:2020-08-04   点击次数:1106次

一.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性,

须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。

1mol/L氯-化钾(KCl):溶解7.46g氯-化钾于足量的水中,加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。

100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基-磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)

5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。

10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。

100%三氯-乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)

2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量

2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水  242g 57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L) 200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 补足1L  

5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液

成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量

445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水  54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 补足1L  

染料

1%溴酚蓝(bromophenol blue)

加1G-水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)

溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)

小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。

凝胶上样液(gel loading solutions)

6×碱性凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量

0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(400型) 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青FF 水  300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml  

6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15%聚蔗糖(400型) 水  1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.5g 补足到10ml  

6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.25%溴酚蓝 0.25%二甲苯青FF 15%聚蔗糖(400型) 水  2.5ml 1%溴酚蓝 2.5ml 1%二甲苯青FF 1.5g  补足到10ml  

6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水  1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 3ml  3.9ml  

6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水  1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 4g  补足到10ml  

10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量

0.2%溴酚蓝 0.2%二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油  水  20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10% SDS 5ml 补足到10ml  

三、常用抗生素

1.  氨苄青霉素(ampicillin)(100 mg/ml)

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

2.  羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml)

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

3.  甲氧西林(methicillin)(100mg/ml)

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

4.  卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml)

溶解100mg卡那霉素于足量的水中,后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

5.  氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml)

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

6.  链霉素(streptomycin)(50mg/ml)

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

7.  萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml)

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

8.  四环素(tetracyyline)(10mg/ml)

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

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