上海远慕生物科技有限公司
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远慕实验：细胞制备流程及转化方法
更新时间：2022-06-01 点击次数：1067次
细胞制备流程及转化方法
1. 转移0.2-1ml培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升摇瓶
2. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时
3. 定时监控OD600值(培养1小时后每半小时测定一次)
4。 当OD600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时)
5. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天)
6. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升)，然后加水稀释至离心管的2/3体积。
7. 照上面步骤重复离心，小心弃去上清液
8. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞
9. 离心，弃上清液
10. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞
11. 照上面步骤离心，小心弃去上清液(沉淀可能会很松散)
12. 用10%甘油重悬浮细胞至zui终体积为2-3ml
13. 将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存
远慕优势：
1，全：公司提供上万种产品，涵盖了生物试剂，elisa试剂盒，标准品，培养基，原装耗材等，基本上各种科研所需产品在我司都能找到。
2，新：产品更新速度较快，基本上每周都有新产品出现。
3，优：产品质量好，*。
4，品牌多：公司代理的试剂品牌：Amresco、Sigma、Fluka、Alfa、TCI、Merck等进口品牌，国产品牌我们价格更优，我们供应优级纯，分析纯，化学纯，试剂级，基准试剂，实验纯，教学试剂，高纯试剂，色谱纯，光谱纯，电子纯等试剂级别（可根据客户需求定制）。
5，售后：我公司具有优质的技术团队，产品一旦售出，实验过程中遇到困难可提供在线技术咨询。使您使用产品时没有任何的后顾之忧。
试剂处理提示：
1、购买后，请务必确认标签上的注意事项。
2、做好预防颠倒，摔坏的措施和管理体制。
3、在使用前再次确认标签上的注意事项。做好必要的安全对策。
4、对没有标明其危险特性，有害特性的，也要慎重地进行操作。
5、必须戴好防护用具，小心翼翼进行操作。
6、请参照相关法规，文献，MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性，再进行安全操作。
7、通常购买试剂时要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，要更加注意其保管和管理。
8、万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。
9、对于使用后的废弃物，不要或旧的试剂，应按照相关法律法规正当处理。
细胞制备流程及转化方法：
1. 转移0.2-1ml培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升摇瓶
2. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时
3. 定时监控OD600值(培养1小时后每半小时测定一次)
4。 当OD600值达到0.5-1.0时，从摇床中取出摇瓶，置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时)
5. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟，弃上清液(如需要，沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天)
6. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升)，然后加水稀释至离心管的2/3体积。
7. 照上面步骤重复离心，小心弃去上清液
8. 照上面步骤用灭菌的冰水重悬浮细胞
9. 离心，弃上清液
10. 用20ml灭菌的、冰冷后的10%甘油重悬浮细胞
11. 照上面步骤离心，小心弃去上清液(沉淀可能会很松散)
12. 用10%甘油重悬浮细胞至zui终体积为2-3ml
13. 将细胞按150μl等份装入微量离心管，于-80°C保存
