做微生物培养实验新手入门指南！

 微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到许多外界因素的影响，如营养物浓度、温度、水分、氧气、pH等。微生物的种类不同，培养的方式和条件也不尽相同。

影响微生物生长的因素很多，简要介绍如下：

（1）水分
水分是微生物实验室培养中进行生长的必要条件。芽孢、孢子萌发，首先需要水分。
微生物是不能脱离水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生长，而不能生活在纯水中。各种微生物在不能生长发育的水分活性范Χ内，均具有狭小的适当的水分活性区域。

（2）温度
在一定的温度范Χ内，种微生物都有自已的生长温度三基点：
最/低生长温度
最适生长温度
最高生长温度
在生长温度三基点内，微生物都能生长，但生长速率不一样。微生物只有处于最适生长温度时，生长速度才最快，用时最短。超过最/低或最高生长温度，微生物不会生长，甚至会死亡。

一般情况下，微生物的生长温度三基点是恒定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。根据微生物最适生长温度的不同，可将它们分为三个类型：
a.嗜冷微生物：其最适生长温度多数在-10℃－20℃之间
b.中温微生物：其最适生长温度一般在20℃－45℃之间
c.嗜热微生物：生长温度在45℃以上。

（3）营养物浓度
细菌的生长率与营养物的浓度有关:μ=μmax*C/(K+C) ，营养物浓度与生长率的关系曲线是典型的双曲线。
K值是细菌生长的很基本的特性常数。它的数值很小，表明细菌所需要的营养浓度非常之低。
然而营养太低时，细菌生长就会遇到困难，甚至还会死亡。这是因为除了生长需要能量以外，细菌还需要能量来维持它的生存。这种能量称为维持能。

（4）氧气
按照微生物对氧气的需要情况，可将它们分为以下五个类型。
a. 需氧微生物：这类微生物需要氧气供呼吸之用，有氧气，便不能生长。但是高浓度的氧气对需氧微生物也是有毒的，很多需氧微生物不能在氧气浓度大于大气中氧气浓度的条件下生长。绝大多数微生物都属于这个类型。
b. 兼性需氧微生物：这类微生物在有氧气存在或无氧气存在情况下，都能生长，只不过所进行的代谢途径不同罢了。在无氧气存在的条件下，它进行发酵作用，例如酵母菌的无氧乙醇发酵。
c. 微量需氧微生物：这类菌是需要氧气的，但只在0.2大气压下生长最好。这可能是由一它们含有在强氧化条件下失活的，因而只有在低压下作用。
d. 耐氧微生物：这类微生物在生长过程中，不需要氧气，但也不怕氧气存在，不会被氧气所杀死。
e. 厌氧微生物：这类微生物在生长过程中，不需要分子氧。分子氧存在对它们生长产生毒害，不是被抑制，就是被杀死。

实验室微生物培养方法

根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。
（1）好氧培养：也称“好气培养"。这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。
在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。
三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶中。

（2）厌氧培养：也称“厌气培养"。这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，最重要的一点就是要除去培养基中的氧气。
一般可采用下列几种方法：
a.降低培养基中的氧化还原电λ：常将还原剂如谷胱/甘肽、硫基醋酸盐等，加入到培养基中，便可达到目的。有的将一些动物的死的或活的组织如牛心、羊脑加入到培养基中，也可适合厌氧菌的生长。
b.化合去氧：这也有很多方法，主要有：用焦性食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气；用好氧菌与厌氧混合培养吸收氧气；用植物组织如发芽的种子吸收氧气；用产生氢气与氧化合的方法除氧。
c.隔绝阻氧：深层液体培养；用石蜡油封存；半固体穿刺培养。
d.替代驱氧：用二氧气碳驱代氧气；用氮气驱代氧气；用真空驱代氧气；用氢气驱代氧气；用混和气体驱代氧气。

根据培养基的物理状态，可分为固体培养和液体培养两大类。
（1）固质培养：是将菌种接至疏松而富有营养的固体培养基中，在合适的条件下进行微生物培养的方法。
（2）液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。

微生物实验室常用菌种保藏法

菌种的保藏常采用干燥、低温和隔绝空气等措施，将其新陈代谢限制在最/低范Χ内，使其生命活动处于半永/久性的休眠状态，使菌种能够存活、不污染杂菌、不发生或较少发生变异，保存菌种原有的各种生物学性状。较常用的菌种保藏法有斜面或半固体传代保藏法，以及冷冻真空干燥法和液氮超低温保藏法。

1. 斜面或半固体传代保藏法
此法保藏菌种常用的培养基有普通肉汤琼脂斜面、血清斜面、血琼脂斜面、鸡蛋斜面和血清肉汤半固体培养基等等。
在斜面或半固体培养基表面，往往加入灭菌液体石蜡，用以隔绝空气。此外，厌氧菌的传代保藏则常采用疮肉基。

2. 冷冻真空干燥法
将加入一定保护剂（如无菌脱脂牛奶）的菌种悬液冷冻，然后在冻结状态下经过真空干燥，使菌种处于半永/久性的休眠状态，从而达到长久保藏的目的。一般可保藏数年甚至数十年之久。该法需要特殊的低温干燥设备。

3. 液氮超低温保藏法
将保藏的菌种分散在保护剂中（如甘油、二甲亚枫、蔗糖和吐温80等），或将平板上生长良好的培养物打块，原封不动地置于保护剂中，预冻后保藏在液氮超低温（-196℃）中。该法是目前较理想的菌种保藏方法，可较长期保藏菌种。