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技术支持

PCR 扩增产物出现多条带(杂带)解决方法

更新时间:2022-09-16   点击次数:912次

  扩增产物出现多条带(杂带)

  1) 引物用量偏大,引物的特异性不高。

  应调换引物或降低引物的使用量。

  2) 循环的次数过多。

  适当增加模板的量,减少循环次数。

  3) 酶的用量偏高或酶的质量不好。

  应降低酶量或调换另一来源的酶。

  4) 退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。

  应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的PCR扩增。以2度为梯度设计梯度PCR反应优化退火温度。

  5) 样品处理不当。

  6) Mg2+浓度偏高。

  因适当调整Mg2+使用浓度。

  7) 若为PCR试剂盒。

  也可能时试剂盒本身质量有问题。

  8) 复制提前终止。

  使用非热启动的聚合酶时常有发生。冰上准备反应体系或采用热启动聚合酶。

  9) 反应缓冲液未*融化或未充分混匀。

  确保反应缓冲液融化*并*混匀。

  10) 引物特异性差。

  利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

  11) 引物量过多。

  减少反应体系中引物的用量。

  12) 模板量过多。

  质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。

  13) 外源DNA污染。

  确保操作的洁净。

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