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技术支持

什么是引物?如何溶解和保存引物?

发布时间:2022-10-11   点击次数:577次

什么是引物?

引物(primer),是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在核酸合成反应时,作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离的。

如何溶解引物?

干燥后的引物质地非常疏松,开盖前最好瞬时离心一下,或管垂直向上在桌面上敲敲,将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或TE(pH8.0)缓冲液,室温放置几分钟,振荡助溶,离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水,因为有些蒸馏水的pH值比较低(pH4-5),引物在这种条件下不稳定。

如何保存引物?

引物合成后,经过一系列处理和纯化步骤,旋转干燥而成无色或白色絮状干粉。

干 粉:运输时常温运输,-20℃可以保存一年。

储存液:配好后分装成几管,避免反复冻融,-20℃可以保存半年。

工作液:常规使用,4℃保存,也可-20℃保存,但应避免反复冻融。

修饰荧光引物:需要避光保存,尽快使用为宜。

引物设计的基本原则:

1、引物长度:15-30bp,常用为20bp左右。

2、引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。

3、引物内部不应出现互补序列。

4、两个引物之间不应存在互补序列,尤其是避免3 ′端的互补重叠。

5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%,引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有*互补序列。

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