甘油冷冻保藏菌种的方法及注意事项

　　菌种保藏是将微生物菌种采用适宜的方法妥善保藏，避免其死亡、污染，并保持其原有性状基本稳定的一种实验方法，也是微生物实验室极为重要的一项基础性工作。

　　甘油冷冻保藏菌种是目前实验室应用广泛的一种的菌种保藏方法，原理是以甘油为保护剂，低温冷冻条件下，使微生物的新陈代谢趋于停止，从而达到长期有效的保藏。一般来说，保藏温度越低，保藏效果越好。主要有以下注意事项：

1.选择合适的培养基

勿使用选择性培养基。一般使用非选择性的增菌培养基，因为微生物在选择性培养基中生长某些生物特性可能丢失，保藏的菌种的生物特性可能与标准菌株特性不同。

2.菌液的浓度

菌液的浓度一般越大，菌种保存时间越长。保藏时细菌常使用菌液，霉菌常用无菌水或生理盐水制备成的孢子悬液。

3.甘油浓度

甘油终浓度一般为10%~20%。由于甘油原液太粘稠，需要配制合适的甘油-水溶液，将菌悬液与甘油以1:1的体积比充分混匀后，分装至提前灭菌好的保藏管中，-20℃以下冰箱保存。

4.反复使用

对菌种进行保藏时注意“慢冻快化”，冷冻时降温速率保持1℃/min,复苏时用37℃水浴融化，能够保证菌种最大的成活率。当冷冻菌种融化后，应避免再次冷冻，否则菌体的生存率会大幅度降低。

5.保存时间

该方法适合中长期菌种保藏，保藏时间一般为2-3年左右。