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技术支持

分子生物学实验常用试剂配制

发布时间:2022-11-21   点击次数:273次

一. 常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完/全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。

1mol/L氯/化钾(KCl):溶解7.46g氯/化钾于足量的水中,加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。

25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2•6H2O于足量的水中,定容到100ml。

100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基/磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完/全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套)

5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。

10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完/全溶解后用水定容至1L。

10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完/全溶解。用水定容至1L。

2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。

100%三氯/乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完/全溶解。(稀释液应在临用前配制)

2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂(Denhardt’s regent) 成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量

2%聚蔗糖(Ficoll,400型) 2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40) 2%BSA(组分V)

水 2g 2g 2g

加水至总体积为100ml ,依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接) 成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺(可选):50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA(组分V)(可选):0.5ml 10 mg/mL 贮液 ,水: 2.25ml

将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions) 可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液 成分及终浓度 配制20ul溶液各成分的用量

10mmol/L dATP

10mmol/L dCTP

10mmol/L dGTP

10mmol/L dTTP

水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液

2ul 100 mmol/L dCTP 贮液

2ul 100 mmol/L dGTP 贮液

2ul 100 mmol/L dTTP 贮液

12ul

20%PEG 8000/2.5M NaCl

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20%聚乙二醇

2.5mol/L 氯化钠

水 20g

50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠

补足100ml

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L 柠檬酸三钠(二水)

3mol/L 氯化钠

水 88.2g

175.3g

补足1L

溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。

DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水

加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺(deionized formamide)

直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。

磷酸缓冲液(phosphate buffer)

按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4•H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。

1mol/L 磷酸二氢钠(ml) 1mol/L 磷酸氢二钠(ml) 最终pH值

TE(用于悬浮和贮存DNA)

成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量

10mmol/L Tris-HCl

1mmol/L EDTA

水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)

200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)

98.8ml

Tris缓冲液(Tris-HCl buffer)

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。

浓盐酸的体积(ml) pH

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