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技术支持

干粉培养基使用灭菌处理方式介绍

更新时间:2023-02-03   点击次数:432次

干粉培养基在使用之前必须进行灭菌处理,将其所含活菌全部杀死或全部除去。常用的灭菌方法有过滤除菌、干热灭菌、湿热灭菌及辐照灭菌等。

其中,湿热灭菌法又包括四种方式:煮沸法、流动蒸汽灭菌法、间歇灭菌法和压力蒸汽灭菌法。通常来说,使用比较多的是压力蒸汽灭菌法。

但是对于有些培养基来说,高压条件会损坏培养基中的某些成分,不利于培养基的使用,所以只能采用煮沸灭菌的处理方法。

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接下来远慕生物主要就煮沸灭菌方法进行讨论,话不多说一起看看吧。

一、煮沸灭菌的常见表述

有关煮沸灭菌的描述,通常有如下几种方式:

a、称取本品41.5g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸不要超过2分钟。无需高压灭菌。临用时制备,不得超过3小时。
b、称取本品50.3g,加入1000ml蒸馏水中,加热煮沸至*溶解,冷至45-50℃,摇匀,倾入无菌平皿备用。无需高压灭菌。
c、称取本品89g,煮沸溶解于1000ml蒸馏水中,冷至45-50℃时,倾入无菌平皿,备用。注:无需高压灭菌。
d、称取本品57g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,不要过分加热,冷至50-55℃时,倾入无菌平皿,部分开盖干燥2h,然后盖上,备用。无需高压灭菌。在 24小时内使用。

这些方法描述中,都特别强调“无需高压灭菌"、“不要过分加热"、“煮沸充分溶解",那么究竟该怎样操作,才能达到既灭菌*又尽量降低对培养基的破坏呢?

二、煮沸灭菌的实际操作

1、关于煮沸方式,有人提出可以隔水煮沸,但经过反复试验,发现这种煮沸方式存在两大弊端:①温度不够,达不到灭菌效果;②经隔水煮沸的含琼脂培养基,在水浴的过程中易出现分层现象。

2、为了对培养基进行有效煮沸灭菌,根据我们实践摸索,建议如下操作:

①准备好电磁炉和搪瓷缸(不要用铁质容器);

②将培养基按比例加水,称量至搪瓷缸中,用玻璃棒不断搅拌,直至*溶解、无明显团状物或颗粒;

③将搪瓷缸置于电磁炉上,大火烧开,期间持续搅拌,避免糊底;当液面*沸腾后,立即将搪瓷缸从电磁炉上拿开,算是一次煮沸操作;液面回落后,立即放回电磁炉,重复上面的步骤;总共煮沸3次即可。

④将煮好的培养基冷却至需要的温度,进行倾注平皿等操作。

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