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原代细胞不贴壁的原因与解决办法
更新时间:2023-05-11 点击次数:348次
大多数原代贴壁细胞贴壁时间是6h到12h,细胞不贴壁有好多种原因的:
1、如果你用玻璃培养瓶培养的话,有可能你的瓶子没处理好;建议你用一次性培养瓶,进口的都可以。
2、一般做原代细胞贴壁培养用胰酶消化,消化的程度要掌握好,如果消化时间不到、分散不均匀不贴壁。一般消化有热消化,就是放在37度里消化,时间比较短不好控制,传代培养常用。还有就是冷消化放在4度里,一般在几个小时以上,胰酶浓度也有要求的,一般都用0.125-0.25%之间。ph在7.6左右。
3、还有就是天然培养基的选择,就是血清种类,血清能够使细胞贴壁,并且提供细胞生长的重要营养成分。
细胞培养中的不贴壁及分化的解决办法
如果细胞呈现不贴壁现象,且细胞根本就不能锚定的解决办法:
1、可以在铺有琼脂和琼脂糖的培养皿上克隆细胞,也可在衬有琼脂的甲基纤维素的非组织培养用平皿制备细胞克隆。
2、在这些支持物中应适当添加生长因子及添加物。3、如使用组织培养用平皿克隆细胞,应在灌制琼脂等支持物前铺加饲养层。
如果细胞呈现不贴壁现象,但细胞能够锚定但贴壁不佳的解决办法:
使用铺加了甲基纤维素的组织培养用用培养皿进行细胞克隆。
细胞培养如果细胞不发生分化,解决办法如下:
1、更换能够诱导细胞分化的培养条件。
2、在细胞分离和传代中使用选择性培养基。
细胞培养中如果所养细胞丧失产物形成能力,解决办法如下:
1、采用PCR及Northern杂交方法,检测相关基因表达能力。
2、采用PCR及Northern杂交方法检测报告基因和方案。
3、使用分化诱导条件。
4、在细胞分离和传代过程中针对特定细胞使用相应的选择培养基。
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