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上海鸡ELISA试剂盒的操作方法及注意事项
发布时间:2019-06-18   点击次数:168次
  1.用户在首次使用上海鸡ELISA试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
  2.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,之后加底物溶液及终止液,测量时先用此孔调OD值至零。
  3.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
  4.未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。
  5.建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
  标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融,进而进行洗板。洗板方法有如下两种。
  手工洗板方法:吸去或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。
  自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
  正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用鸡血清封闭。
  在上海鸡ELISA试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
  包被抗体或抗原的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
  固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

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