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人胰岛素ELISA检测试剂盒

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人胰岛素ELISA检测试剂盒上海古朵生物是老品牌试剂盒供应商,在这个瞬息万变的市场靠什么站稳脚跟,靠的是信誉、靠的是产品质量、靠的是广大的客户群。

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人胰岛素ELISA检测试剂盒

货号:QY-W0784
规格:48T/96T
保存温度:2-8℃低温保存
规 格:48T,96T
保 质 期:6个月,本公司试剂盒系列产品均为批次,请放心购买

 

人胰岛素(INS)ELISA试剂盒 人胰岛素ELISA检测试剂盒

人(Human)胰岛素(INS)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用  

标本:血清或血浆

试验原理:        
INS试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知INS浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将INS和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中INS的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制:
试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)
塑料膜板盖1块半块标准品:200ng/ml1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)
标准品稀释缓冲液1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)
生物素标记的抗INS抗体1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)
亲和链酶素-HRP1瓶(12ml)1瓶(5ml)
洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)

自备材料:
1.  蒸馏水。
2.  加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.  振荡器及磁力搅拌器等。

4.样品收集、处理及保存方法:
1、 血清……操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、  血浆……EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、  细胞上清液……1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、  组织匀浆……将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、  保存……如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

操作注意事项:
●   试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
●   实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
●   不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
●   使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
●   使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
●   底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
●   加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
●   按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

安全性:
1.   避免直接接触终止液和底物A、B,一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2.   实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.   不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

试剂的准备:
1.   标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:200ng/ml(6号标准品)原倍浓度不用稀释直接加入50ul100ng/ml(5号标准品)100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液50ng/ml(4号标准品)100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液25ng/ml(3号标准品)100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液12.5ng/ml(2号标准品)100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液6.25ng/ml(1号标准品)100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0ng/ml(空白对照)原倍浓度不用稀释直接加入50ul2.   洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

试剂盒性能:
1.   灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2.   特异性:不与其它细胞因子反应。
3.   重复性:板内、板间变异系数均小于10%。

操作步骤:
1.   使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
4.   甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.   甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.   每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
8.   取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.   在450nm波长处测定各孔的OD值。

结 果 判 断 与 分 析:
1、  仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、  以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的INS标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的INS含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
3、  检测值范围: 0-200ng/ml4、  敏感度:0.1ng/ml

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