兔子脑钠素/脑钠尿肽（BNP）ELISA检测试剂盒实验方法
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兔子脑钠素/脑钠尿肽（BNP）ELISA检测试剂盒实验方法详细介绍！供应商：上海远慕生物，规格：48t/96t,中文名：兔子脑钠素/脑钠尿肽（BNP）ELISA试剂盒，别名：兔子脑钠素/脑钠尿肽（BNP）ELISA Kit，特点：灵敏性高、特异性强、重复性好。用途：用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中的含量或活性。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒实验方法由上海远慕生物科技提供详细介绍，本司专业经营进口/国产ELISA试剂盒，动物血清，标准品对照品，染色液，化学试剂，染色液，培养基，抗体，生物分子，微生物，抗生素，抗原，蛋白质，其他试剂，ELISA种属有大鼠，小鼠，人，植物，豚鼠，马，牛，羊，鸡，兔，猪，狗及其他动物，咨询！
中文名：兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒
别名：兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA Kit
供应商：上海远慕
规格：48t/96t
保存：2-8℃
有效期：6个月
特点：灵敏性高、特异性强、重复性好。
使用范围：仅供科研使用,不得用于临床。
产品用途：用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中的含量或活性。
检测种属：大小鼠,人,豚鼠,兔子,猪,犬,牛羊,鸡鸭ELISA试剂盒等种属。
检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
常见ELISA试剂盒：白介素、选择素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、干扰素、转化生长因子、趋化因子、细胞因子受体、粘附分子、生长因子、凋亡因子等等。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒液体类标本：
包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1）血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5）组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒性能：
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度：zui低检测浓度小于（参考说明书）
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒准备：
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。1. 标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒实验方法组成：
1：预包被板: 96T/48T
2：酶标记抗体: (30倍浓缩)HRPIgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3：标准品: -6 0.5mL x 2
4：EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5：标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6：显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7：终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8：浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒操作步骤：
1、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l，待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
2、温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
3、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
4、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。
6、显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
7、终止：每孔加终止液50l，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
8、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
兔子脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA检测试剂盒实验方法：
1、加入待测标本每孔0.05ml，并设HBsAg阳性对照2孔，HBsAg阴性对照2孔，空白对照1孔，然后加入酶结合物每孔1滴（0.05ml、空白对照孔不加），充分混匀后置37℃孵育30分钟。
2、洗板：弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔，弃去拍干，反复五次后拍干。
3、显色剂：先加显色剂A每孔1滴（0.05ml），然后再加显色剂B每孔1滴（0.05ml），混匀，37℃孵育10分钟。
4、每孔加终止液1滴（0.05ml），混匀。
实验结果：
比色法：波长450nm，先用空白孔校零点，然后读取各孔光密度值。
样品OD值/阴性对照平均OD值≥ 2.1判断为阳性，否则为阴性。
备注：阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。阳性对照OD值≥0.8，实验结果有效。
实验注意事项：
1、试剂盒置2℃～8℃保存。
2、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。
3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条，置室温平衡30分钟后再行测试，余者应及时封存于冰箱中以备后用。
本司ELISA试剂盒具有以下优点：
1）快速： 仅需传统夹心法ELISA 1/3的操作时间，1小时即可完成整个试验流程；
2）简单： 只需1个洗涤步骤；
3）灵活： 可单独或同时检测总蛋白及磷酸化蛋白，可在同一板上检测不同的靶蛋白；
4）灵敏： 达到甚至超过行业标准，且结果*性良好；
5）兼容： 常规比色法检测，实验室常规酶标仪读数；
温馨提醒：ELISA加样时的防错小经验
(1)用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这样，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常容易区分。
(2)可以利用液面反光与没有加的孔加以区别。
(3)在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面产生小气泡，也可以加以区分。
