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大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA检测试剂盒说明书

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大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA检测试剂盒说明书详细介绍!供应商:上海古朵生物,保质期:6个月,特点:敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存,操作简便。用途:用于测定血清,血浆及相关液体样本中相关含量或活性。适用范围:仅用于科研实验,禁用于临床。

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中文名:大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒
别名:大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA Kit
供应商:上海古朵
规格:48t/96t
保存:2-8℃
有效期:6个月
特点:敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存,操作简便。
用途:用于测定血清,血浆及相关液体样本中相关含量或活性。
检测种属:大小鼠、人、豚鼠、兔子、猪、犬、牛羊、鸡鸭ELISA试剂盒等种属。
常见ELISA试剂盒:白介素、选择素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、干扰素、转化生长因子、趋化因子、细胞因子受体、粘附分子、生长因子、凋亡因子等等。
适用范围:仅用于科研实验,禁用于临床。

<strong>大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA检测试剂盒说明书</strong>

大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒优双抗体夹心法(检测未知抗原);
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

 

大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒优样品收集、处理及保存方法:
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA检测试剂盒说明书注意事项:   
1.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。   
2.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。   
3.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。   
4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。   
5.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。   
6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。   
7.加入试剂的顺序应*,以保证所有反应板孔温育的时间一样。   
8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。   
9.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

 

大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA检测试剂盒说明书组成:
1:预包被板: 96T/48T
2:酶标记抗体: (30倍浓缩)HRPIgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3:标准品: -6 0.5mL x 2
4:EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5:标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6:显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7:终止液: 1N硫酸 12mL x 1
8:浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1

 

大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)ELISA试剂盒操作步骤:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 
(6)洗板,同(4)。 
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 
(9)洗板,同(4)。 
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。 
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

 

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