一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent （100ml）
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一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent （100ml）详细介绍！品牌：美国Omega，供应商：上海远慕生物，名称：一步法RNA提取试剂盒，货号/型号：R6830-01/RNA-Solv Reagent （100ml），R6830-02/RNA-Solv Reagent （200ml），用途：用传统三相分离法从动物组织/培养细胞中纯化总RNA
一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)，微量病毒ＤＮＡ／ＲＮＡ共提取试剂盒,磁珠MRNA提取试剂盒,SQ 总RNA提取试剂盒,超薄柱型PCR产物纯化试剂盒,超薄柱型琼脂糖凝胶回收试剂盒,DNA探针纯化试剂盒,RNA探针纯化试剂盒,微量DNA纯化试剂盒,玻璃奶琼脂糖凝胶回收试剂盒,离心型染料去除试剂盒,M-13单链DNA提取试剂盒,M-13单链DNA小提/大提/96孔板提取试剂盒,其他系列等均由上海远慕生物专业提供，了解更多美国Omega提取试剂盒产品请！
名称：一步法RNA提取试剂盒
品牌：Omega
供应商：上海远慕
货号/型号：R6830-01/RNA-Solv Reagent (100ml)
货号/型号：R6830-02/RNA-Solv Reagent (200ml)
用途：用传统三相分离法从动物组织/培养细胞中纯化总RNA
一步法RNA提取试剂盒用于从各种动物组织、植物组织、细胞、细菌、酵母和丝状真菌中提取总RNA。提取的总RNA分子完整、纯度高，适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、S1核酸酶作图、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
RNA提取试剂盒特性与优点：
可靠--操作简单
快速--可在1小时内完成多个样品的纯化工作
性价比高--采用单一溶液系统，性格比更高
一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)材料与方法：
1.试剂
变性液（4 mol.L－1异硫氰酸胍，25 mmol.L－1柠檬酸钠pH 7.0，5 g.L－1十二烷基肌氨酸钠,0.1 mol.L－1β－巯基yichun），按文献方法配制；2 mol.L－1的乙酸钠；重蒸酚；lvfang；异丙醇；8－羟基喹啉；柠檬酸；柠檬酸钠；乙酸；乙酸钠；800 ml.L－1yichun.
2.仪器
电泳仪、岛津UV-160型紫外可见分光光度计（日本产）、超声匀浆仪（美国Sonics Material Inc. Jencons产品）、玻璃匀浆器。所用器皿均按RNA提取的一般要求进行处理。
3.标本
大鼠脑组织、脊髓组织、培养细胞。
4.RNA快速提取试剂的制备
酸酚的平衡 取重蒸酚于65℃水浴融化, 加入1 g.L－18-羟基喹啉；用50 mmol.L－1乙酸钠（pH 4.0）平衡。在平衡的过程中不断搅拌，并反复更换乙酸钠，待上清液相的pH值达到4.1为止。
CSB缓冲液的配制 用DEPC处理过的纯水配制CSB缓冲液，由42 mmol.L－1柠檬酸钠、8.3 g.L－1十二烷基肌氨酸钠和0.1 mol.L－1β-巯基yichun组成。
快速RNA提取试剂的配制 用CSB缓冲液配制4 mol.L－1异硫氰酸胍；加入0.1体积4 mol.L－1乙酸钠（pH4.0）, 加入等体积酸酚，0.02体积的异戊醇，混匀，即为RNA快速提取试剂。4℃保存备用。
5.RNA快速提取程序
组织RNA的提取： 将约10～100 mg的组织块置于匀浆仪中，加入1 ml RNA快速提取试剂，进行匀浆；将匀浆液倾入1.5 ml离心管中，加入0.1体积的lvfang，振荡混合20 s；冰上放置5 min；4℃离心12 000 r.min－1, 15 min。离心管中的液体分为3层: 上层为无色透明的无机相，RNA保留于此相中；下层为呈淡黄色的有机相，蛋白质保留于此相中；上下两层的界面处为中间层，DNA保留于此相中。小心吸取上层水相约0.5 ml于新管中，切勿吸取中间层和下层液体，以避免DNA和蛋白质的污染。异丙醇沉淀：加入等体积的－20℃预冷的异丙醇，混匀，4℃离心12 000 r.min－1，15 min, 弃上清；用0.5 ml预冷的80％(体积分数)乙醇洗涤沉淀，弃尽yichun，在空气中自然干燥，溶于适量DEPC处理的水中，用于后续的实验或－80℃保存。培养细胞RNA的提取： 培养细胞生长至旺盛期，弃掉培养基，用冰冷的PBS缓冲液冲洗两次，直接向细胞中加入1～2 ml RNA快速提取试剂，轻轻晃动培养瓶使细胞与RNA快速提取试剂充分接触，冰上放置5 min，吸出粘稠的细胞裂解混合物于新的离心管中，加入0.1体积的lvfang，振荡混匀。其余步骤与上述组织RNA提取方法相同。传统一步法提取RNA，按文献方法进行；用Trireagent 或RNAzol提取RNA，按试剂盒说明操作。
6.RNA的质量、纯度鉴定和浓度测定
取1～2 μl RNA样品在15 g.L－1琼脂糖凝胶上进行电泳，检查RNA的质量，主要观察28 S、18 S和5 S三条带是否清晰，有无降解，以及是否有DNA污染。
取1～2 μl RNA样品溶于1 ml超纯水中，用紫外分光光度法测定D值。以D260值计算其浓度，计算公式:
质量浓度(g.L－1)=40×D260×稀释倍数/1000以D260/D280的比值表示其纯度，比值在1.8～2.0之间为纯的RNA，比值低于1.8，说明RNA样品有蛋白质或酚的污染，需要用lvfang重新抽提。
一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)纯化方式：
采用传统的三相分离的纯化方式，适合于从小于100mg组织或1×107个细胞中提取总RNA。该溶液（RNA-Solv Reagent)主要是酚和异硫氰酸胍组成的单一溶液，由经典的一步法RNA提取方法改进而来。该方法允许操作者一次同时处理多个样品的提取工作，所时间不到1小时；纯化的RNA可直接用于Northern杂交、点杂交、RT-PCR、体外翻译等实验。 组织在RNA-Solv溶液中裂解后，室温放置1-2min，裂解细胞和失活内源性的RNase酶，加入***后离心分成三层，分别是有机相层（包括：基因组DNA,蛋白质,杂质），中间层（蛋白质）以及水相层(RNA)；转移含RNA的上清液至新的离心管中，加入异丙醇离心沉淀RNA，经75%乙醇洗涤去除盐分，空气干燥后加入DEPC水溶解RNA。
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