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一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)

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一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)详细介绍!品牌:美国Omega,供应商:上海古朵生物,名称:一步法RNA提取试剂盒,货号/型号:R6830-01/RNA-Solv Reagent (100ml),R6830-02/RNA-Solv Reagent (200ml),用途:用传统三相分离法从动物组织/培养细胞中纯化总RNA

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一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml),微量病毒DNA/RNA共提取试剂盒,磁珠MRNA提取试剂盒,SQ 总RNA提取试剂盒,超薄柱型PCR产物纯化试剂盒,超薄柱型琼脂糖凝胶回收试剂盒,DNA探针纯化试剂盒,RNA探针纯化试剂盒,微量DNA纯化试剂盒,玻璃奶琼脂糖凝胶回收试剂盒,离心型染料去除试剂盒,M-13单链DNA提取试剂盒,M-13单链DNA小提/大提/96孔板提取试剂盒,其他系列等均由上海古朵生物专业提供,了解更多美国Omega提取试剂盒产品请!

 

名称:一步法RNA提取试剂盒

品牌:Omega

供应商:上海古朵

货号/型号:R6830-01/RNA-Solv Reagent (100ml)

货号/型号:R6830-02/RNA-Solv Reagent (200ml)

用途:用传统三相分离法从动物组织/培养细胞中纯化总RNA

<strong>一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)</strong>

一步法RNA提取试剂盒用于从各种动物组织、植物组织、细胞、细菌、酵母和丝状真菌中提取总RNA。提取的总RNA分子完整、纯度高,适用于Northern Blot 、RT-PCR、体外翻译、Primer Extension、S1核酸酶作图、RNase保护测定、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。
 

 

RNA提取试剂盒特性与优点:

可靠--操作简单

快速--可在1小时内完成多个样品的纯化工作

性价比高--采用单一溶液系统,性格比更高

 

 

一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)材料与方法:

1.试剂
变性液(4 mol.L-1异硫氰酸胍,25 mmol.L-1柠檬酸钠pH 7.0,5 g.L-1十二烷基肌氨酸钠,0.1 mol.L-1β-巯基yichun),按文献方法配制;2 mol.L-1的乙酸钠;重蒸酚;lvfang;异丙醇;8-羟基喹啉;柠檬酸;柠檬酸钠;乙酸;乙酸钠;800 ml.L-1yichun.


2.仪器
电泳仪、岛津UV-160型紫外可见分光光度计(日本产)、超声匀浆仪(美国Sonics Material Inc. Jencons产品)、玻璃匀浆器。所用器皿均按RNA提取的一般要求进行处理。


3.标本
大鼠脑组织、脊髓组织、培养细胞。


4.RNA快速提取试剂的制备
 酸酚的平衡 取重蒸酚于65℃水浴融化, 加入1 g.L-18-羟基喹啉;用50 mmol.L-1乙酸钠(pH 4.0)平衡。在平衡的过程中不断搅拌,并反复更换乙酸钠,待上清液相的pH值达到4.1为止。

CSB缓冲液的配制 用DEPC处理过的纯水配制CSB缓冲液,由42 mmol.L-1柠檬酸钠、8.3 g.L-1十二烷基肌氨酸钠和0.1 mol.L-1β-巯基yichun组成。

快速RNA提取试剂的配制 用CSB缓冲液配制4 mol.L-1异硫氰酸胍;加入0.1体积4 mol.L-1乙酸钠(pH4.0), 加入等体积酸酚,0.02体积的异戊醇,混匀,即为RNA快速提取试剂。4℃保存备用。


5.RNA快速提取程序

组织RNA的提取: 将约10~100 mg的组织块置于匀浆仪中,加入1 ml RNA快速提取试剂,进行匀浆;将匀浆液倾入1.5 ml离心管中,加入0.1体积的lvfang,振荡混合20 s;冰上放置5 min;4℃离心12 000 r.min-1, 15 min。离心管中的液体分为3层: 上层为无色透明的无机相,RNA保留于此相中;下层为呈淡黄色的有机相,蛋白质保留于此相中;上下两层的界面处为中间层,DNA保留于此相中。小心吸取上层水相约0.5 ml于新管中,切勿吸取中间层和下层液体,以避免DNA和蛋白质的污染。异丙醇沉淀:加入等体积的-20℃预冷的异丙醇,混匀,4℃离心12 000 r.min-1,15 min, 弃上清;用0.5 ml预冷的80%(体积分数)乙醇洗涤沉淀,弃尽yichun,在空气中自然干燥,溶于适量DEPC处理的水中,用于后续的实验或-80℃保存。培养细胞RNA的提取: 培养细胞生长至旺盛期,弃掉培养基,用冰冷的PBS缓冲液冲洗两次,直接向细胞中加入1~2 ml RNA快速提取试剂,轻轻晃动培养瓶使细胞与RNA快速提取试剂充分接触,冰上放置5 min,吸出粘稠的细胞裂解混合物于新的离心管中,加入0.1体积的lvfang,振荡混匀。其余步骤与上述组织RNA提取方法相同。传统一步法提取RNA,按文献方法进行;用Trireagent 或RNAzol提取RNA,按试剂盒说明操作。

 

6.RNA的质量、纯度鉴定和浓度测定
取1~2 μl RNA样品在15 g.L-1琼脂糖凝胶上进行电泳,检查RNA的质量,主要观察28 S、18 S和5 S三条带是否清晰,有无降解,以及是否有DNA污染。

取1~2 μl RNA样品溶于1 ml超纯水中,用紫外分光光度法测定D值。以D260值计算其浓度,计算公式:
质量浓度(g.L-1)=40×D260×稀释倍数/1000以D260/D280的比值表示其纯度,比值在1.8~2.0之间为纯的RNA,比值低于1.8,说明RNA样品有蛋白质或酚的污染,需要用lvfang重新抽提。

 

一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)纯化方式:

采用传统的三相分离的纯化方式,适合于从小于100mg组织或1×107个细胞中提取总RNA。该溶液(RNA-Solv Reagent)主要是酚和异硫氰酸胍组成的单一溶液,由经典的一步法RNA提取方法改进而来。该方法允许操作者一次同时处理多个样品的提取工作,所时间不到1小时;纯化的RNA可直接用于Northern杂交、点杂交、RT-PCR、体外翻译等实验。 组织在RNA-Solv溶液中裂解后,室温放置1-2min,裂解细胞和失活内源性的RNase酶,加入***后离心分成三层,分别是有机相层(包括:基因组DNA,蛋白质,杂质),中间层(蛋白质)以及水相层(RNA);转移含RNA的上清液至新的离心管中,加入异丙醇离心沉淀RNA,经75%乙醇洗涤去除盐分,空气干燥后加入DEPC水溶解RNA。

 

标签:一步法RNA提取试剂盒RNA-Solv Reagent (100ml)   RNA提取试剂盒

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