
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)
中文名:过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法),供应商:上海远慕,规格:100T,分类:氧化检测,保存:4℃,避光,12个月,用途:定量检测血清、血浆、组织、细胞等样品中的过氧化氢酶(CAT)活性,产品说明:在Z佳酶反应条件下,过氧化氢与钼酸铵形成稳定的黄色复合物,其黄色深浅与酶活性成正比。适用范围:本试剂盒仅用于科研领域。
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中文名:过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)
供应商:上海远慕
规格:100T
分类:氧化检测
保存:4℃,避光,12个月
用途:定量检测血清、血浆、组织、细胞等样品中的过氧化氢酶(CAT)活性
产品说明:在*酶反应条件下,过氧化氢与钼酸铵形成稳定的黄色复合物,其黄色深浅与酶活性成正比。
适用范围:本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)检测原理:
是血清或血浆等样本中在*酶反应条件下,反应后剩余的H2O2与钼酸铵形成稳定的黄色复合物,其黄色深浅与酶活性成反比,通过分光光度计或酶标仪检测405nm处吸光度。该酶的检测对于研究自由基代谢平衡,抗衰老和肿瘤发病机制具有一定的价值。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)操作步骤(仅供参考):
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。
e,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)注意事项:
1.本试剂盒亦可用酶标仪进行检测,但检测的样本数相应增多。如果有条件,尽量采用 分光光度计检测。
2.待测样品中不能含有CAT抑制剂,同时需避免反复冻融。
3.如果出现浑浊或絮状物,应弃用。
4.完整的红细胞以及未稀释的溶血液中的过氧化氢酶置于4℃一周仍然很稳定,稀释后的 溶血液中CAT容易失活。
5.下降3.5%。因此,待测样品均应-20℃或-70℃保存。
6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。