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Triton-NH4OH细胞裂解液配制方法

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Triton-NH4OH细胞裂解液配制方法配制方法详细介绍,中文名:Triton-NH4OH细胞裂解液,供应商:上海古朵,规格:500ml,分类:细胞组分分离,保存:4℃,6个月,用途: 裂解细胞获得细胞外基质 ,说明:主要由0.5%TritonX-100、20mMNH4OH、PBS组成,适用范围:限于科研,实验,不作临床

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Triton-NH4OH细胞裂解液配制方法配制方法详细介绍:

中文名:Triton-NH4OH细胞裂解液

供应商:上海古朵

规格:500ml

分类:细胞组分分离

保存:4℃,6个月

用途: 裂解细胞获得细胞外基质 

说明:主要由0.5%TritonX-100、20mMNH4OH、PBS组成

适用范围:限于科研,实验,不作临床

<strong><strong><strong><strong><strong>Triton-NH4OH细胞裂解液配制方法</strong></strong></strong></strong></strong>配制方法详细介绍

Triton-NH4OH细胞裂解液操作步骤:

1.制备细胞悬液: 新鲜组织经过胰蛋白酶或胶原酶等消化处理,通过适当方法制备成细胞悬液,离心弃上清。   

2.裂解: 加入3~5倍细胞沉淀体积的Triton-NH4OH Lysis Buffer,轻柔吹打混匀,裂解。本操作步骤在4℃条件下操作更佳,亦可在室温下操作。 

3.离心: 4℃,离心5min,弃红色上清。如无低温离心机,本步骤亦可在室温下操作。 

4.如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3各一次。 

5.洗涤:根据实验要求加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,轻柔混匀重悬沉淀。4℃,离心2~3min,弃上清,该离心步骤亦可在室温下操作。所加入的PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液的量一般应大于细胞沉淀体积的5倍以上。

6.如有必要,重复上述步骤5一次,共洗涤1~2次。 

7.根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀,进行计数、培养等后续实验。

 

配制方法注意事项: 

1.制备细胞悬液时应根据实验需要,不一定要制备成单细胞悬液。 

2.后续试验如果是用于细胞培养,操作过程中应注意无菌操作,尽量在超净工作台内操作。

3.离心步骤尽量在4℃离心机上操作。 

4.常规步骤与快速步骤的区别在于:常规步骤多了一步洗涤过程的离心,可以节省洗涤液的用量,并且洗涤效果也更好,不需要大体积的离心管;快速步骤少了一次离心过程,洗涤效果略差一些,同时需要大体积的离心管。 

5.离心洗涤后,通常极微量的红细胞不会影响后续的检测。 

6.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

配制方法

1.收集胰蛋白酶消化的细胞并离心,用PBS清洗。

2.用100μl RIPA缓冲液冰浴溶解沉淀10min(每500000个细胞20μl RIPA缓冲液)。

3.10000rpm,4℃离心10min,取上清转移至新管。

4.用考马斯亮蓝法检测蛋白质浓度。

5.用裂解缓冲液将溶液浓度调到5mg/ml,每小瓶中放100μl,-80℃储存。

6.按照1:1体积比混合2×样品缓冲液,煮沸5min后,室温放置5min.

7.短时离心后点样电泳检测。

 

Triton-NH4OH细胞裂解液说明:

Triton-NH4OH细胞裂解液(Triton-NH4OH Lysis Buffer)经过优化配方,在裂解无核红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(Lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。本裂解液经过滤除菌,经过Triton-NH4OH Lysis Buffer处理过的血液或组织细胞样品可以用于后续的细胞培养、细胞融合以及核酸或蛋白的提取及各种常规的分析和检测。​

 

标签:Triton-NH4OH细胞裂解液细胞裂解液

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