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骆驼内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒说明书

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骆驼内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒说明书,检测范围:人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。

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    骆驼内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒,适用范围,性能优点,操作步骤及其他咨讯由上海远慕生物提供,本司还生产销售动物血清血浆,标准品对照品,培养基,抗体,抗原,抗生素,维生素,蛋白质,生化试剂,化学试剂,染色液,溶液,缓冲液,实验耗材,其他实验试剂等,了解更多产品咨讯!

    中文名:骆驼内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒

    中文别名:骆驼内皮素1(ET-1)ELISA Kit

    供应商:上海远慕

    规格:48t/96t

    有效期:6个月

    ELISA试剂盒成分:酶标板,试剂,标准品等。

    检测范围:人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪、其它动物细胞因子、植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体、血栓与止血、肿瘤、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。

    适用范围:主要用于科研方面,不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。

    特点:敏感性高、特异性强、重复性好、试剂稳定、易保存,操作简便。

    骆驼内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒说明书:用于测定血清,血浆及相关液体样本中相关含量或活性。

 

    骆驼内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒说明书样本处理及要求:

    1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

    2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

    3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

    4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

    5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

    6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。

    7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

    技术原理:

    (1)。 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

    (2)。 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

    (3)。 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。

    (4)。 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。

    (5)。 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

    (6)。 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

    组成及试剂配制:

    1:预包被板: 96T/48T

    2:酶标记抗体: (30倍浓缩)HRPIgG,亲合纯化 0.4mL x 1

    3:标准品: -6 0.5mL x 2

    4:EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1

    5:标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1

    6:显色剂: TMB底物液 15mL x 1

    7:终止液: 1N 12mL x 1

    8:浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1

    操作步骤:

    (1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。

    (2)酶标板置4℃,包被过夜。

    (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

    (4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。

    (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。

    (6)洗板,同(4)。

    (7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

    (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。

    (9)洗板,同(4)。

    (10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。

    (11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

    (12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

    (13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

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