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Buffer DP, 100ml溶液

  • 型   号:PDR047
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上海古朵生物供应Buffer DP, 100ml溶液 上海古朵生物是一家集研发、销售为一体的高新技术生物企业,公司专注于生命科学和生物技术领域,专业提供分子生物学、免疫学、生命科学基础研究以及临床检测等诸多领域的试剂、耗材、仪器等各类产品及生物技术服务。

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上海古朵生物供应Buffer DP, 100ml溶液  上海古朵生物是一家集研发、销售为一体的高新技术生物企业,公司专注于生命科学和生物技术领域,专业提供分子生物学、免疫学、生命科学基础研究以及临床检测等诸多领域的试剂、耗材、仪器等各类产品及生物技术服务。

 

 

Buffer DP, 100ml溶液  RNA的抽提:
1.  在经变性液匀浆的细胞或组织600 ul+60 ul pH4.0的2 M 乙酸钠彻底混匀,可用漩涡振荡器。
2.  600 ul 酚氯fang异戊醇(25241),彻底混匀或漩涡振荡器振荡10秒。
3.  冰裕中10~15分钟,离心,4℃,10 000 g,20分钟。
4.  上层水相吸至无菌离心管中加等体积的异丙醇,-70℃,30分钟沉淀RNA。
5.  离心4℃,10 000 g,20分钟。
6.  沉淀RNA ,冷冻干燥15分钟 , RNA 沉淀重新溶于300 ul 变性液中,可振荡(有时为了帮助溶解,可在65℃加热,但时间应极短)。
7.  60 ul pH4.0的2 M 乙酸钠彻底混匀,可用漩涡振荡器。
8.  600 ul 酚氯fang异戊醇(25241),彻底混匀或漩涡振荡器振荡10秒。
9.  冰裕中10~15分钟,离心,4℃,10 000 g,20分钟。
10.  上层水相吸至无菌离心管中。
11.  等体积异丙醇二次沉淀(-70℃,30分钟),75%乙醇洗沉淀,沉淀冷冻干燥。
12.  复溶于去RNA 酶的水中(对于准备长期保存的RNA 可加入pH 5.0的乙酸钠至终浓度为0.25 M,再加入2.5体积的乙醇,-70℃保存。)。

 

 RNA提取注意事项
1、将研钵,研杵,试剂瓶,容量瓶(配溶液用),三角瓶(溶胶用),药匙,玻璃棒等,用锡箔纸包住在烘箱中高温烘烤(180℃ 8hr,或200℃ 4hr)。
2、 配0.1% DEPC-H2O:将DEPC母液按比例(H2O:DEPC=1000:1)溶于双蒸水中,在37℃摇床上摇荡过夜,注意避免光照。DEPC-H2O主要作两种用途,一则用于处理试验中所用的器具,如不能高温烘烤的离心管等,除RNA酶,作此用途时不能高压灭菌,一则是用于配制提取过程中所用的溶液,如5M Nacl溶液,75%酒精等,配制前先要高压灭菌。故配制时或一次配两份,或配后用高温烘烤过的试剂瓶分装。注意:DEPC是挥发性有毒试剂,且见光分解,配制时注意防护,最hao单独灭菌,配后避光保存。
3、 定购无RNase的专用枪头和Eppendorf管。否则,要用DEPC水处理并且摇荡过夜,然后高压灭菌。
4、用DEPC水配制Nacl溶液,75%酒精,及MOPS缓冲液等;氯fang、异丙醇,无水乙醇等用新开封的试剂,最hao用烘烤过的试剂瓶分装。
5、将电泳槽,制胶槽、梳子用0.1mol/L NaOH洗涤浸泡10-20min,然后用DEPC-H2O冲洗干净,再用75%的酒精擦拭干,备用。
6、准备消毒的厚手套一双,乳胶手套若干双。


优势:
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